單細(xì)胞光控誘導(dǎo)新方案，替代傳統(tǒng)他莫昔芬

背景簡(jiǎn)介：

Cre?ERT2、Gal4?ERT2 化學(xué)誘導(dǎo)系統(tǒng)是基因編輯與發(fā)育生物學(xué)經(jīng)典工具，常規(guī)依靠他莫昔芬全域加藥誘導(dǎo)蛋白入核、啟動(dòng)基因重組，但固有短板難以規(guī)避：

1藥液全域擴(kuò)散，無(wú)法實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞、局部組織定點(diǎn)誘導(dǎo)，難以區(qū)分局部與整體細(xì)胞表型；

2.他莫昔芬穩(wěn)定性差、極易滲漏，陰性對(duì)照組常出現(xiàn)非特異性提前激活，實(shí)驗(yàn)本底偏高；

3.藥物一次性起效，誘導(dǎo)時(shí)間無(wú)法人為精準(zhǔn)把控，不利于捕捉胚胎瞬時(shí)發(fā)育、細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化。

法國(guó) Idylle-labs 聯(lián)合法國(guó)國(guó)家科研中心 CNRS Ludovic Jullien 課題組，依托《ChemBioChem》原始研究成果，自研Actiflash 籠合型光控小分子試劑，將傳統(tǒng)全皿化學(xué)誘導(dǎo)升級(jí)為紫外 / 雙光子定點(diǎn)光控誘導(dǎo)；避光條件下試劑無(wú)生物活性，僅在指定波長(zhǎng)光照后定點(diǎn)產(chǎn)生活性配體，現(xiàn)已成為 ERT2 時(shí)空精準(zhǔn)調(diào)控領(lǐng)域優(yōu)選試劑。

產(chǎn)品作用原理：

Actiflash 為籠合環(huán)芬衍生物（Caged Cyclofen-OH，他莫昔芬同骨架衍生物），作用邏輯清晰：

1.避光靜置階段：分子呈籠狀封閉結(jié)構(gòu)，無(wú)游離活性配體，無(wú)法結(jié)合 ERT2 靶點(diǎn)，零自發(fā)本底激活，常溫避光孵育可自由穿透細(xì)胞膜；

2.光照脫籠階段：325~425 nm 長(zhǎng)波紫外、750 nm 雙光子 / 1064 nm 三光子紅外激光定點(diǎn)照射，斷裂籠合保護(hù)基團(tuán)，瞬時(shí)釋放活性 Cyclofen?OH；

3.蛋白入核起效：活性配體結(jié)合 ERT2 結(jié)構(gòu)域，促使 Cre、Gal4、激酶、轉(zhuǎn)錄因子等融合蛋白脫離胞質(zhì)抑制蛋白并入核，啟動(dòng)基因重組、靶基因轉(zhuǎn)錄或靶蛋白激活。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1.單細(xì)胞級(jí)時(shí)空精準(zhǔn)誘導(dǎo)：依托激光局部定點(diǎn)激發(fā)，僅激活單個(gè)細(xì)胞或小塊胚胎組織，輕松構(gòu)建嵌合突變體，解決傳統(tǒng)全板同步給藥的局限性；

2.超低本底、陰性結(jié)果干凈：避光孵育全程無(wú)活性物質(zhì)泄露，對(duì)比他莫昔芬無(wú)提前激活問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性更佳；

3.活性產(chǎn)物理化穩(wěn)定：光照生成的 Cyclofen?OH 抗光降解，適配長(zhǎng)時(shí)間活細(xì)胞連續(xù)成像，誘導(dǎo)效果穩(wěn)定持久；

4.激發(fā)波段細(xì)胞毒性低：選用長(zhǎng)波紫外與紅外多光子激發(fā)，規(guī)避短波紫外帶來(lái)的細(xì)胞、胚胎光損傷，適配斑馬魚(yú)胚胎、原代細(xì)胞活體實(shí)驗(yàn)；

5.操作簡(jiǎn)便，細(xì)胞滲透性優(yōu)異：小分子直接添加至培養(yǎng)液即可使用，細(xì)胞常規(guī)工作濃度 3-5 uM，無(wú)需額外助溶劑與轉(zhuǎn)染處理。

產(chǎn)品應(yīng)用：

1.Cre?LoxP 系統(tǒng)定點(diǎn)基因敲除 / 敲入，實(shí)現(xiàn)局部組織特異性基因編輯；

2.Gal4?UAS 體系單細(xì)胞瞬時(shí)過(guò)表達(dá)，探究瞬時(shí)基因表達(dá)引發(fā)的細(xì)胞表型改變；

3.原位定點(diǎn)激活凋亡、抑癌蛋白，動(dòng)態(tài)觀測(cè)細(xì)胞增殖與凋亡變化；

4.斑馬魚(yú)胚胎細(xì)胞譜系示蹤，解析器官發(fā)育、細(xì)胞遷移機(jī)制；

5.體外抗腫瘤藥理、靶蛋白瞬時(shí)調(diào)控相關(guān)機(jī)理探究。

產(chǎn)品信息：

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